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荧光素酶报告基因

荧光素酶：能产生生物光信号的酶的总称。常见的有萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。酶可以催化自身底物的氧化，其中一部分能量以光子的形式释放出来，即生物发光信号。

报告基因：基因表达变化或与基因表达变化相关的细胞事件的指示器。

基本机制：一般以萤火虫荧光素酶作为主要报告基因，将目的基因构建在载体上，从而反映目的序列的作用结果。荧光素酶在存在荧光素、ATP和其他细胞离子的情况下促进光的产生。

荧光素酶

海肾荧光

普通酶

药物筛选的应用：

荧光素酶报告基因具有高灵敏度、特异性和高通量的特点，因此通过筛选先导化合物，小分子有机化合物有可能替代生物大分子作为药物。

荧光素酶基因标记细胞：

细胞生长和增殖、基因表达和信号转导的体外检测被广泛使用。体内细胞可通过转染或直接注射进行荧光素酶标记，通过分子影像技术进行定量、定性和体内追踪研究。

miRNA研究

验证microRNA与mRNA之间的靶向相互作用：将待检测mRNA的3’UTR序列插入报告基因载体，然后转移到microRNA中。荧光素酶活性的降低表明它是靶序列。

检测方法

1)电化学发光技术

MSD电化学发光检测技术使用sulftagtm标记。多阵列多运动微孔板的电极表面通电后，电化学作用激发sulftagtm标记发出强光。

灵敏度高，线性范围宽：线性范围可达6log，灵敏度为0.05~1pg/mL。

高重复性：板内CV 6-8%，板间CV 10%，批次间CV 15%。

2)液体流动技术(Luminex)流动荧光，又称悬浮阵列、液体芯片等。是近20年来逐渐发展起来的多指标联合诊断技术。该技术以荧光编码微球为核心，集成流动原理、激光分析、高速数字信号处理等技术，多指标并行分析，最多可在一个试管内同时准确检测2-100种不同的生物分子。它具有高通量、高灵敏度和平行检测的特点。可用于免疫分析、核酸研究、酶分析、受体和配体识别分析等多领域研究。LabEx药物研发与应用

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